敲除 P2RY8：解鎖腫瘤浸潤能力

腫瘤會產生一種分子，該分子會激活T細胞上的P2RY8受體，如同一個煞車，從物理上阻止T細胞進入腫瘤。刪除P2RY8等於移除了這個煞車，導致T細胞大量湧入實體腫瘤，數量遠超從前 。P2RY8基因編碼一種G蛋白偶聯受體（GPCR），該受體一旦被激活，便會透過Gα13傳送信號，限制T細胞的遷移。透過破壞這條訊號路徑，研究人員使T細胞能夠在腫瘤內累積到標準CAR-T細胞無法達到的水平 。

敲除 GNAS：維持抗癌活性

一旦進入腫瘤內部，T細胞會面臨充滿抑制信號的惡劣微環境。GNAS（編碼Gαs蛋白）充當一個中央信號中樞，處理來自腫瘤微環境的多種抑制信號。刪除GNAS使T細胞在很大程度上對這些信號不再敏感，使它們能夠維持高水平干擾素-γ（IFN-γ）的產生，這是一種關鍵的抗腫瘤效應分子 。這使得T細胞能夠抵抗通常在實體腫瘤內削弱免疫功能的免疫抑制條件。

協同組合：浸潤與活性兼具

同時移除P2RY8和GNAS能產生協同效應：T細胞既能以更大數量進入腫瘤，又能在進入後保持高度活性。在一個肺癌小鼠模型中，即使使用極低劑量的CAR-T細胞，接受雙重編輯CAR-T細胞治療的小鼠中，有三分之二在實驗結束時體內已無腫瘤，而接受對照編輯CAR-T細胞的小鼠則無一例清除腫瘤 。

廣泛適用於多種實體腫瘤模型

這些編輯的好處不僅限於肺癌。僅刪除GNAS的CAR-T細胞就能在多個實體腫瘤模型中縮小腫瘤，包括黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、胃食管腺癌和子宮肉瘤 。當從卵巢癌和黑色素瘤患者身上提取的T細胞中測試這些組合編輯時，也觀察到同樣的效果，證實了其應用於患者來源細胞的可轉化性 。

在腫瘤清除後，對小鼠進行了超過六個月的追蹤，未觀察到長期副作用，這表明其安全性良好 。

一個新的發現平台

對P2RY8和GNAS的識別，得益於由同一團隊開發的一種新型體內CRISPR篩選平台。該平台允許在帶有腫瘤的小鼠體內，對原代人類T細胞進行全基因組功能喪失篩選，克服了以往CRISPR篩選僅限於體外環境或需要大量動物的限制 。該系統涉及在腫瘤細胞上過度表現CD3 scFv，以實現對浸潤腫瘤的T細胞的高效回收，從而在使用相對較少動物的情況下進行全面分析 。

對癌症免疫療法的啟示

這些發現代表著在使CAR-T細胞療法對抗實體腫瘤方面邁出了重要一步，而實體腫瘤占所有癌症的絕大多數。這種雙重編輯策略解決了實體腫瘤免疫療法的兩個最關鍵障礙：T細胞浸潤能力差和免疫抑制性腫瘤微環境。在長期小鼠研究中觀察到的良好安全性，也支持了其進一步發展以邁向臨床測試 。

敲除 P2RY8：解鎖腫瘤浸潤能力

腫瘤會產生一種分子，該分子會激活T細胞上的P2RY8受體，如同一個煞車，從物理上阻止T細胞進入腫瘤。刪除P2RY8等於移除了這個煞車，導致T細胞大量湧入實體腫瘤，數量遠超從前 。P2RY8基因編碼一種G蛋白偶聯受體（GPCR），該受體一旦被激活，便會透過Gα13傳送信號，限制T細胞的遷移。透過破壞這條訊號路徑，研究人員使T細胞能夠在腫瘤內累積到標準CAR-T細胞無法達到的水平 。

敲除 GNAS：維持抗癌活性

一旦進入腫瘤內部，T細胞會面臨充滿抑制信號的惡劣微環境。GNAS（編碼Gαs蛋白）充當一個中央信號中樞，處理來自腫瘤微環境的多種抑制信號。刪除GNAS使T細胞在很大程度上對這些信號不再敏感，使它們能夠維持高水平干擾素-γ（IFN-γ）的產生，這是一種關鍵的抗腫瘤效應分子 。這使得T細胞能夠抵抗通常在實體腫瘤內削弱免疫功能的免疫抑制條件。

協同組合：浸潤與活性兼具

同時移除P2RY8和GNAS能產生協同效應：T細胞既能以更大數量進入腫瘤，又能在進入後保持高度活性。在一個肺癌小鼠模型中，即使使用極低劑量的CAR-T細胞，接受雙重編輯CAR-T細胞治療的小鼠中，有三分之二在實驗結束時體內已無腫瘤，而接受對照編輯CAR-T細胞的小鼠則無一例清除腫瘤 。

廣泛適用於多種實體腫瘤模型

這些編輯的好處不僅限於肺癌。僅刪除GNAS的CAR-T細胞就能在多個實體腫瘤模型中縮小腫瘤，包括黑色素瘤、肺癌、胰腺癌、胃食管腺癌和子宮肉瘤 。當從卵巢癌和黑色素瘤患者身上提取的T細胞中測試這些組合編輯時，也觀察到同樣的效果，證實了其應用於患者來源細胞的可轉化性 。

在腫瘤清除後，對小鼠進行了超過六個月的追蹤，未觀察到長期副作用，這表明其安全性良好 。

一個新的發現平台

對P2RY8和GNAS的識別，得益於由同一團隊開發的一種新型體內CRISPR篩選平台。該平台允許在帶有腫瘤的小鼠體內，對原代人類T細胞進行全基因組功能喪失篩選，克服了以往CRISPR篩選僅限於體外環境或需要大量動物的限制 。該系統涉及在腫瘤細胞上過度表現CD3 scFv，以實現對浸潤腫瘤的T細胞的高效回收，從而在使用相對較少動物的情況下進行全面分析 。

對癌症免疫療法的啟示

這些發現代表著在使CAR-T細胞療法對抗實體腫瘤方面邁出了重要一步，而實體腫瘤占所有癌症的絕大多數。這種雙重編輯策略解決了實體腫瘤免疫療法的兩個最關鍵障礙：T細胞浸潤能力差和免疫抑制性腫瘤微環境。在長期小鼠研究中觀察到的良好安全性，也支持了其進一步發展以邁向臨床測試 。