蛋白毒性係重要風險因子。
重組蛋白毒性喺 E. coli 表達入面係已知問題,甚至促成了 C41(DE3)、C43(DE3) 呢啲更適合表達 toxic proteins 嘅 BL21 衍生菌株嘅使用。P
喺特定 BL21(DE3) 代謝工程模型入面,IPTG 加上有毒底物會造成顯著生理壓力;呢個唔可以概括成「IPTG 一定有毒」,但係就說明 induction 條件可能會加劇本已受負擔嘅細胞狀態。P
所以對原本問題最精確嘅結論係:
如果 parent cells 經過 overnight induction 後仍然保留完整、可用嘅 expression plasmid 同調控元件,而且後續新培養有足夠世代恢復健康生長,咁後代喺主培養後期原則上仍然可以用 IPTG 再誘導。
但係呢種做法會增加表現失敗、產量下降同批次變異嘅機率,特別係高拷貝質粒、強 promoter、蛋白有毒、37°C 長時間誘導或者高 IPTG 嘅情況。NPPP
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實驗上,如果要判斷你哋嗰批係咪真係「已失去 induction 能力」,最有說服力嘅唔係理論推斷,而係喺新培養入面抽樣單菌落:確認抗性、做 plasmid restriction digest/sequencing,並以相同 OD、相同 IPTG 條件同未誘導 seed 對照做 SDS-PAGE 或 Western blot。