Startkonsentrasjoner av magnesiumsulfat, ammoniumsulfat, ammoniumklorid og vitaminer i E. coli high-cell-density-fermentering

Det finnes ingen enkeltpublikasjon som gir en universell «beste» startkonsentrasjon for alle E. coli high-cell-density-fermenteringer. I stedet har vi samlet typiske arbeidsområder fra vanlige definerte og semi-definerte medier. Hovedkulturmediet bruker vanligvis ammoniumsulfat eller ammoniumklorid – ikke begge samtidig – med mindre pH styres med ammoniakk, som da kan utgjøre hovednitrogenkilden.

Komponent	Eksempelmedium/referanse	Startarbeidskonsentrasjon, g/L	Ca. mM	Kommentar
MgSO₄	M9/M63 minimalmedier: vanligvis 1 mM MgSO₄; M63 tilsetter MgSO₄ i etterkant	MgSO₄ (vannfri) ~0,12 g/L; MgSO₄·7H₂O ~0,25 g/L	~1 mM	1 mM er typisk; semi-definert høycelletetthetsmedium bruker 0,24 g/L
MgSO₄	Semi-definert medium for E. coli DH5α	0,24 g/L	~0,97 mM (MgSO₄·7H₂O) / ~2,0 mM (vannfri)	mM avhenger av hydratform; litteraturen spesifiserer ikke alltid
(NH₄)₂SO₄	M63 minimalmedium	2,0 g/L (1×); 5× M63: 10 g/L, 1× = 2 g/L	~15,1 mM (NH₄)₂SO₄; ~30,3 mM NH₄⁺	Typisk definert medium med ammoniumsulfat
NH₄Cl	M9 minimalmedium	1,0 g/L (1×); 5× M9: 5 g/L, 1× = 1 g/L	~18,7 mM NH₄Cl/NH₄⁺	Typisk definert medium med ammoniumklorid
NH₄Cl	Semi-definert høycelletetthetsmedium for E. coli	1,5 g/L	~28,0 mM	Inneholder glukose, fosfatbuffer, NaCl, MgSO₄, NH₄Cl og gjærekstrakt
Vitaminer: thiamine-HCl	Eppendorf applikasjonsnotat for high-density fed-batch: thiamine-HCl stamløsning 5 g/L	Utilstrekkelig dokumentasjon	Utilstrekkelig dokumentasjon	Thiamine tilsettes ofte i definerte medier, men sluttkonsentrasjon er ikke oppgitt
Vitaminer: gjærekstrakt som kilde	Semi-definert høycelletetthetsformulering	12 g/L gjærekstrakt	Ikke relevant	Gjærekstrakt er en kompleks blanding, ikke enkeltvitamin

• M9-lignende medier bruker NH₄Cl, M63-lignende medier bruker (NH₄)₂SO₄ .
• I high-cell-density fed-batch trenger ikke startmediet høye nitrogenkonsentrasjoner; nitrogen tilføres ofte via pH-kontroll med ammoniakk eller ammoniumhydroksid .
• Anbefalte startområder: MgSO₄ ~1–2 mM; NH₄Cl ~19–28 mM; (NH₄)₂SO₄ ~15 mM; for vitaminer, bruk gjærekstrakt 5–12 g/L eller thiamine-HCl (konsentrasjon må bestemmes via DOE) .