特定のBL21(DE3)代謝工学モデルでは、IPTGと毒性基質の組み合わせが顕著な生理的ストレスを引き起こすことが示されている。ただし、これは「IPTGは常に有毒である」と一般化できるものではなく、誘導条件が既に負荷のある細胞状態を悪化させる可能性があることを示している。
最も正確な結論は以下の通りである:
親細胞が一晩の誘導後も完全で機能的な発現プラスミドと調節エレメントを保持しており、かつ新しい培養で十分な世代数を経て健全な増殖が回復すれば、本培養後期においても再度IPTGで誘導することは原理的に可能である。
しかしながら、このアプローチは発現失敗、収量低下、ロット間変動のリスクを高める。特に以下の条件下ではそのリスクが顕著である:
実際に「誘導能力を失った」かどうかを判断するには、理論的な推測ではなく、新しい培養から単一コロニーを採取し、以下の確認を行うことが最も確実である:
Mairhofer J, et al. Evaluation of three industrial Escherichia coli strains in fed-batch cultivations during recombinant protein production. Microbial Cell Factories. 2013. — 誘導後の増殖とプラスミド喪失に関する複数宿主の比較。
Tripathi NK, et al. Impact of the Expression System on Recombinant Protein Production in Escherichia coli. 2021. — 外来タンパク質の転写・翻訳における代謝負荷と発現系の選択に関する議論。
Kopp J, et al. Optimizing recombinant protein expression via automated induction profiling in Escherichia coli. 2017. — IPTG濃度、温度、代謝負荷が増殖と発現に与える影響を示す。
The Impact of IPTG Induction on Plasmid Stability and Heterologous Protein Production. 2020. — IPTG誘導、細胞生存率/増殖、プラスミド安定性の関係を直接検討。
Baneyx F. Recombinant protein expression in Escherichia coli. Current Opinion in Biotechnology. 1999. — 高コピープラスミド、毒性/増殖低下を引き起こす外来遺伝子、高密度培養がプラスミド喪失リスクを高めることを説明。
Mairhofer J, et al. Exacerbation of substrate toxicity by IPTG in Escherichia coli BL21(DE3). Microbial Cell Factories. 2015. — 特定システムにおいてIPTGが既存の細胞ストレスを悪化させる実験例。
Saida F. The toxicity of recombinant proteins in Escherichia coli. Applied Microbiology and Biotechnology. 2004. — 組換えタンパク質毒性と適切な宿主菌株のレビュー。