प्रोटीन विषाक्तता एक महत्वपूर्ण जोखिम कारक है।
E. coli में पुनः संयोजक प्रोटीन विषाक्तता एक ज्ञात समस्या है, जिसके कारण विषाक्त प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए उपयुक्त C41(DE3), C43(DE3) जैसे BL21 व्युत्पन्न उपभेदों का विकास हुआ ।
एक विशिष्ट BL21(DE3) चयापचय इंजीनियरिंग मॉडल में, IPTG और विषाक्त सब्सट्रेट ने महत्वपूर्ण शारीरिक तनाव पैदा किया; इसे 'IPTG निश्चित रूप से विषाक्त है' के रूप में सामान्यीकृत नहीं किया जा सकता है, लेकिन यह दर्शाता है कि प्रेरण की स्थितियां पहले से ही बोझिल कोशिका स्थिति को बढ़ा सकती हैं ।
तो मूल प्रश्न का सबसे सटीक निष्कर्ष है:
यदि मूल कोशिकाएं रात भर प्रेरण के बाद भी पूर्ण, उपयोगी अभिव्यक्ति प्लास्मिड और नियामक तत्वों को बनाए रखती हैं, और बाद के नए संवर्धन में स्वस्थ वृद्धि को बहाल करने के लिए पर्याप्त पीढ़ियां हैं, तो संतति मुख्य संवर्धन के बाद के चरणों में सैद्धांतिक रूप से IPTG के साथ पुनः प्रेरित हो सकती है।
लेकिन यह अभ्यास अभिव्यक्ति विफलता, उपज में कमी और बैच भिन्नता की संभावना को बढ़ाता है, विशेष रूप से उच्च प्रतिलिपि संख्या वाले प्लास्मिड, मजबूत प्रमोटर, विषाक्त प्रोटीन, 37°C पर लंबे समय तक प्रेरण या उच्च IPTG की स्थितियों में ।
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प्रयोगात्मक रूप से, यह निर्धारित करने के लिए कि क्या आपका बैच वास्तव में 'प्रेरण क्षमता खो चुका है', सबसे ठोस तरीका सैद्धांतिक अनुमान नहीं बल्कि नए संवर्धन से एकल कॉलोनियों का नमूना लेना है: एंटीबायोटिक प्रतिरोध की पुष्टि करें, प्लास्मिड प्रतिबंध पाचन/अनुक्रमण करें, और समान OD, समान IPTG स्थितियों और अप्रेरित बीज नियंत्रण के साथ SDS-PAGE या वेस्टर्न ब्लॉट करें।