Jaké koncentrace hořčíku, amonných solí a vitamínů zvolit pro startovní médium při vysokohustotní fermentaci E. coli?

Kličové shrnutí a praktická doporučení

1. Volba zdroje dusíku: V literatuře se pro startovní média používá buď síran amonný (např. M63), nebo chlorid amonný (např. M9). Oba zdroje se běžně nekombinují . Pokud je pH regulováno čpavkovou vodou (NH₄OH), tvoří tato významný dodatečný zdroj dusíku během fed-batch fáze, a počáteční koncentrace v batch médiu pak může být nižší.

2. Fed-batch strategie: Pro dosažení opravdu vysokých hustot (desítky až stovky g/L sušiny) je standardem fed-batch režim, kde je růst řízen limitací uhlíku (např. glukózou) . Počáteční koncentrace dusíku v batch médiu není tak kritická, protože většina dusíku se dodává až během fermentace.

3. Doporučené startovní rozsahy pro batch médium:

   • MgSO₄: 1–2 mM.
   • NH₄Cl: 19–28 mM (přibližně 1,0–1,5 g/L).
   • (NH₄)₂SO₄: ~15 mM (přibližně 2,0 g/L).
   • Vitamíny: Při použití komplexního zdroje (kvasničný extrakt) 5–12 g/L. Pro definovaná média s thiaminem je nutné vycházet z konkrétního protokolu (např. z fed-batch metody nebo receptury M63 ), protože dostupná data neposkytují spolehlivý jednotný rozsah .