سمية البروتين عامل خطر مهم.
سمية البروتين المُعاد تركيبه هي مشكلة معروفة في التعبير في E. coli، وقد أدت إلى تطوير سلالات مشتقة من BL21 مثل C41(DE3) و C43(DE3) والتي تناسب التعبير عن البروتينات السامة P. في أحد نماذج الهندسة الأيضية مع BL21(DE3) المحددة، أدى استخدام IPTG مع ركيزة سامة إلى ضغط فسيولوجي ملحوظ؛ لكن هذا لا يمكن تعميمه ليقول إن "IPTG سام دائمًا"، بل يوضح أن ظروف التحريض قد تزيد من تفاقم حالة الخلايا التي تعاني أساسًا من عبء P.
الاستنتاج الأكثر دقة للمشكلة الأصلية هو:
إذا كانت الخلايا الأم قد احتفظت بعد التحريض الليلي ببلازميد تعبير سليم وقابل للاستخدام مع عناصر تنظيمية سليمة، وتمكنت الأجيال اللاحقة من التعافي بما يكفي من الأجيال في المزرعة الجديدة، فإنه يمكن نظريًا إعادة تحريضها في المرحلة اللاحقة من المزرعة الرئيسية. لكن هذا الإجراء يزيد من احتمالية فشل التعبير، وانخفاض الإنتاجية، وعدم تجانس الدفعات، خاصة في حالات استخدام بلازميدات عالية النسخ، ومحفز قوي، وبروتين سام، وتحريض طويل عند 37 درجة مئوية، أو تراكيز عالية من IPTG NPPP.
المراجع المقترحة:
Mairhofer J, et al. Evaluation of three industrial Escherichia coli strains in fed-batch cultivations during recombinant protein production. Microbial Cell Factories. 2013. — يقارن عدة عوائل مستضيفة من حيث النمو وفقدان البلازميد بعد التحريض N.
Tripathi NK, et al. Impact of the Expression System on Recombinant Protein Production in Escherichia coli. 2021. — يناقش العبء الأيضي لنسخ وترجمة الجينات الأجنبية P.
Kopp J, et al. Optimizing recombinant protein expression via automated induction profiling in Escherichia coli. 2017. — يوضح أهمية تركيز IPTG ودرجة الحرارة والعبء الأيضي على النمو والتعبير P.
van Loosdrecht MCM, et al. The Impact of IPTG Induction on Plasmid Stability and Heterologous Protein Production. 2020. — يفحص مباشرة العلاقة بين تحريض IPTG وحيوية الخلية/نموها واستقرار البلازميد P.
Baneyx F. Recombinant protein expression in Escherichia coli. Current Opinion in Biotechnology. 1999؛ ومراجعات لاحقة. — يشرح أن البلازميدات عالية النسخ والجينات الأجنبية السامة/المبطئة للنمو والزراعة عالية الكثافة جميعها تزيد من خطر فقدان البلازميد S.
Mairhofer J, et al. Exacerbation of substrate toxicity by IPTG in Escherichia coli BL21(DE3). Microbial Cell Factories. 2015. — مثال تجريبي على تفاقم الضغط الخلوي بواسطة IPTG في نظام معين P.
Saida F. The toxicity of recombinant proteins in Escherichia coli. Applied Microbiology and Biotechnology. 2004. — مراجعة لسمية البروتين المُعاد تركيبه والسلالات المناسبة P.
تجريبيًا، لتحديد ما إذا كانت دفعتكم قد "فقدت حقًا القدرة على التحريض"، فإن الطريقة الأكثر إقناعًا ليست الاستنتاج النظري، بل أخذ مستعمرات فردية من المزرعة الجديدة: التحقق من المقاومة، وعمل هضم للبلازميد / تسلسل، ومقارنة التعبير بنفس OD ونفس ظروف IPTG مع تحكم (بذور غير محفزة) باستخدام SDS-PAGE أو Western blot.